制作仅需2-3周，更加安全有效，基于CRISPR的CAR-T新疗法来袭

时间：2023-07-18 作者：盛诺一家

摘要

CAR T细胞疗法通常被称为 “活体药物”，已成功治疗了白血病和淋巴瘤等血癌。这种方法由MSK斯隆首创，它为患者自身的免疫细胞（称为T细胞）配备了特殊的受体，这些受体能发现体内的癌症并对其发起免疫攻击。

为了使这种疗法更加精确有效，MSK斯隆正在开展一项临床试验，测试使用一种名为CRISPR/Cas9（原核生物的一种天然免疫系统）的基因组编辑工具制造的CAR T细胞。

这一最新进展得益于MSK细胞工程中心及基因转移和基因表达实验室主任Michel Sadelain与MSK斯隆细胞治疗和细胞工程部门主任Isabelle Rivière的合作。

由血液肿瘤医生Jae Park领导的这项临床试验预示着，该试验有可能改变免疫疗法的未来。

Michel Sadelain医生（左）和Isabelle Rivière医生（中）率先取得了许多CAR T细胞方面的进展。目前，研究人员们正利用CRISPR技术制造CAR T细胞。这项技术正在Jae Park医生（右）领导的一项临床试验中接受测试。

利用CRISPR技术创造CAR T细胞的优势

CRISPR能让研究人员精确靶向并修改T细胞基因组中的特定基因，从而使CAR T细胞更好地发挥作用。2017年，Sadelain医生在《自然》杂志上报告说，通过利用CRISPR在特定位置插入基因，CAR T细胞能在实验白血病小鼠中更有效地杀死人类肿瘤细胞。

他说到：“许多免疫疗法之所以受阻，是因为T细胞一开始会攻击癌细胞，但随后就会衰竭，这种现象被称为T细胞衰竭。” CRISPR CAR T细胞似乎更有韧性，能够持续更长时间地与癌细胞作战。

Rivière医生解释说：“以前，CAR T细胞用改良病毒将CAR[嵌合抗原受体]传递给免疫细胞，这种方法能将CAR插入T细胞基因组的任何位置。但是这种有点分散的方法可能会产生不必要的副作用。CRISPR可以实现更有针对性的传递。”

在2017年的研究中，Sadelain医生的团队证实了在一个名为TRAC的精确位置剪开DNA的可能性。由于插入的CAR在该染色体位置的精确定位，工程细胞可以更容易地打开和关闭CAR。在传统的CAR T细胞中，CAR一直处于 "开启 "状态，这会导致细胞一开始很强大，但很快就会失去动力。而CRISPR CAR T细胞似乎能保存能量，持续时间更长。

在Rivière医生的领导下，MSK斯隆的细胞治疗和细胞工程团队完善了制造这些细胞的方法，使其适合临床应用。

利用CRISPR CAR T细胞治疗弥漫性大B细胞淋巴癌

Park医生领导的一期临床试验使用了CRISPR编辑的CAR T细胞来治疗弥漫性大B细胞淋巴瘤，这是一种最常见的非霍奇金淋巴瘤。CAR T细胞能靶向癌细胞表面一种名为CD19的蛋白质。

Rivière医生说：“我们在CAR中插入了一种名为1XX的分子，并将其引入TRAC位置，从而进一步增强了T细胞的作用。这使得细胞更有效，并延长了它们的效力。”

“这项试验将测试三种不同剂量的CRISPR CAR T细胞，以确定既有效又安全的最低剂量，”Park医生说。该试验将招募约20名患者，预计耗时两年左右。

MSK斯隆目前正在进行一项针对同一疾病的1期临床试验，同样由Park医生领导。该试验正在测试靶向CD19并包含1XX分子的CAR T细胞，但采用的是传统方法，使用的是改良病毒。1期试验的中期结果已于2022年12月在美国血液学会年会上公布。

Park医生说：“结果显示，这种方法安全有效，CAR T细胞的剂量相对较低，这非常鼓舞人心。我们可以利用首次试验来指导新的CRISPR试验，继续深入研究。”

降低CAR T细胞的剂量

研究人员希望临床试验能证明CRISPR CAR T细胞能更好地根除患者所患的癌症，并能减少每次注射所需的细胞数量。

Rivière医生说：“如果细胞持续时间更长，我们最终需要的细胞数量就会减少，这将使生产变得更容易。此外，如果CRISPR细胞的存活时间更长，它们就有可能发现那些在输注后没有被立即杀死、而可能在以后重新出现的癌细胞。在MSK斯隆建立用于细胞工程的CRISPR技术将带来更多的可能性"。

利用CRISPR技术从健康供体获得异体“现货型”疗法

如果CRISPR方法在患者身上奏效，这就可能成为使用捐赠T细胞取代患者自身T细胞的起点，因为这有助于减少异体治疗中常见的副作用：防止移植的捐赠细胞攻击患者的正常细胞。这种反应被称为移植物抗宿主疾病（GVHD），通常会导致胃肠道、眼睛、皮肤、肝脏和其它组织出现问题。

Rivière医生说：“CRISPR的精确性可以让T细胞的一部分失去引发GVHD的能力。此外，从现成的健康供体T细胞库中提取异体T细胞进行治疗可以加快治疗所需时间，因为患者不需要用自己的细胞制造CAR T细胞。这个过程可能需要一个月或更长时间，不过在MSK斯隆，这个过程已经缩短到两到三周。”

今年年初，MSK斯隆报告了异体CAR T细胞（通过传统方法制造）治疗多发性骨髓瘤的卓越成果。多家公司和学术团队正在研究异体CRISPR CAR T细胞。

Sadelain医生说："到目前为止，它们似乎有一个缺点，与患者自身细胞制成的CAR T细胞相比，它们的作用时间不长。这一挑战值得我们做进一步研究。”

MSK斯隆开发CAR T细胞疗法的历史

2007年，也是在Sadelain医生建立细胞工程和制造部门，并由Rivière医生担任主任八年后，MSK斯隆成为首家将CD19 CAR T细胞注入慢性淋巴细胞白血病患者体内的机构。围绕MSK斯隆细胞工程中心建立的强大项目使MSK能够：